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Resposta de cura histológica de incisões em tecidos molesfeitas por laser de diodo na pele de coelhos



Mohammed Mahmood Jawad, Mohammad Khursheed Alam, Sarah Talib AbdulQader, Lehadh Mohammed Al-Azzawi, Adam Husein, Ali Shukur Mahmood


RESUMO


Antecedentes: O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta de cicatrização histológica da incisão de tecidos moles feita por laser diodo 940 nm (Ga Al As) na pele de coelhos.

Materiais e Métodos: Foram utilizados 31 (trinta e um) coelhos, 15 incisões na pele de cada coelho foram feitas por laser diodo de potências (1,5 W, 3 W e 5 W). As incisões foram agrupadas em três grupos principais: incisões com bisturi, incisões a laser de 1,5 W, 3 W e 5 W. Um quarto grupo é um grupo de controle de pele normal de coelho. Cada grupo foi subdividido em sete subgrupos conforme o tempo de sacrifício dos animais para avaliação que foi 12 horas, 1, 3, 7, 14, 21 e 28 dias respectivamente. Cada subgrupo era de 5 coelhos. A cicatrização foi precoce e normal, sem cicatrizes histológicas nas incisões feitas com laser de potência de 1,5 W, em comparação com incisões com laser de potência de 3 W e 5 W.

Resultados e Conclusão: Este estudo mostra que as respostas de cicatrização em incisões feitas com laser de diodo de potência de 1,5 W foram melhores do que aquelas feitas com potências de laser de diodo de 3 W e 5 W.


INTRODUÇÃO


Muitos estudos descobriram que o laser de diodo pode ser usado para remover lesões de tecidos moles, como lesões benignas, pré-malignas ou malignas). No entanto, não adquire maior capacidade do que o bisturi para curar essas condições, mas relativamente é um meio preciso de remoção do tecido afetado com pouco desconforto para o paciente).

A capacidade do laser de realizar cirurgia hemostática, selando os vasos sanguíneos, é vantajosa, ao significar que uma cirurgia mais precisa pode ser realizada em um campo sem sangue e também pode diminuir a disseminação de células malignas no momento da cirurgia). Da mesma forma, a capacidade do laser de selar os vasos linfáticos no momento da cirurgia possibilita diminuir o inchaço e o edema associado à cirurgia). Isso pode diminuir a necessidade de administração de esteroides no pós-operatório. A vedação dos vasos linfáticos também pode diminuir a possibilidade de disseminação de células malignas nos vasos linfáticos no momento da cirurgia). Além disso, a capacidade de selar as terminações nervosas permite diminuir o desconforto pós-operatório). A capacidade do laser de deixar uma ferida limpa, seca e selada é a razão provável para a baixa taxa de infecção observada após a cirurgia a laser). As feridas do laser também podem cicatrizar com pouca cicatriz e contração da ferida. Além disso, alguns procedimentos antes realizados em ambiente hospitalar agora podem ser realizados ambulatorialmente com uso do laser).

O uso de lasers em justaposição com endoscópios em procedimentos de rejuvenescimento facial virou do avesso a cirurgia estética), por proporcionarem os resultados estéticos desejados e oferecem ao paciente menos desconforto pós-operatório e recuperação mais rápida). É importante que o cirurgião tenha pelo menos uma compreensão fundamental da tecnologia qualitativa do laser e da operação essencial dos lasers que são mais úteis na prática clínica). O objetivo deste estudo é expressar a resposta cicatricial histológica das incisões de tecidos moles criadas por laser diodo de onda contínua (CW) com comprimentos de onda de 940 nm de diferentes parâmetros de potência preparados em amostras de pele de coelhos.


MATERIAIS E MÉTODOS


Animais e habitação


O Comitê de Ética Animal da Universidade de Bagdá aprovou nosso protocolo de estudo. As diretrizes para o uso de animais de laboratório foram rigorosamente seguidas durante todo o estudo. Foram utilizados neste estudo 31 coelhos saudáveis de raça local (wiled), pesando 2.000 ± 100 g e 6 meses. Os animais foram alojados em gaiolas de arame separadas, sob supervisão da equipe veterinária do Centro de Pesquisa em Biotecnologia da Universidade de Bagdá. Os animais foram alojados em ambiente claro/escuro de 12 horas com temperatura de 23°. Sua dieta era composta por pellets que continham proteínas e vitaminas e também forneciam água da torneira.


Dispositivo laser


O sistema de laser utilizado neste estudo foi o laser de diodo Ga-Al-As (eslase, EUA) com comprimento de onda de 940 nm. O modo de operação poderia ser contínuo (CW) ou modulado (cortado), para este estudo o modo de operação foi contínuo (CW). O sistema de entrega é uma fibra óptica flexível que transporta toda a energia emitida pela fonte de diodo para a peça de mão. O tamanho do spot do laser é de 200 μm de diâmetro segundo a peça de mão utilizada, sendo utilizado com movimentos de varredura com leve contato com o tecido mole tratado. A posição da ponta foi sempre mantida perpendicularmente à superfície irradiada. Durante a aplicação do laser, o terapeuta e o auxiliar utilizaram filtro ocular de proteção e os olhos de todos na sala cirúrgica protegidos por óculos de segurança.


Preparo dos animais


Cada coelho foi deitado de lado; o local da operação foi no lado do abdômen em que é raspado e dividido por um marcador cirúrgico em duas áreas iguais. Cada área foi considerada área de um subgrupo, o mesmo procedimento foi feito no outro lado do coelho. Foi administrada  Xilazina (Sanofi, França) na dose de 5 mg/kg por injeção intramuscular para induzir condição hipnótica sedativa; isso é seguido cerca de 10 minutos depois por uma injeção intramuscular de 50 mg/kg de cloridrato de cetamina (Claris, Índia) para obter anestesia dissociativa. Após a anestesia, os campos operatórios foram devidamente cobertos com toalhas esterilizadas e desinfetados com solução de Betadine (iodopovidona 10%).


Estudos preliminaresUm dos coelhos foi usado para determinar as potências de saída ideais para o laser de diodo funcionar com ele, neste estudo, o trabalho de estudo preliminar começou com 0,5 W e a potência do laser foi aumentada 0,5 W cada vez no modo CW. O laser passou a fazer incisão na pele a 1,5 W e continuou funcionando eficientemente até atingir a potência de 5 W, a carbonização era evidente ao ultrapassar esta potência, portanto as potências do laser que foram selecionadas para serem utilizadas neste estudo foram 1,5, 3 e 5 W com densidades de potência de 1,19, 2,38 e 3,98 KW\cm2, respectivamente.


Procedimento cirúrgico e modelo de estudo


Neste estudo, foram feitas 15 incisões na pele de cada coelho incluído neste experimento, realizadas no Instituto de Laser para Estudos de Pós-Graduação/Universidade de Bagdá. Todas as incisões tinham 1 cm de comprimento medido pelo calibre e a profundidade até a espessura total da pele com distância de separação entre as incisões não inferior a 1 cm conforme recomendado por Taylor et al.20). A peça de mão a laser nos grupos de incisão a laser estava operando em modo de contato com onda contínua (CW) na pele. O tempo de preparo de cada incisão foi medido por cronômetro. Após realizar as incisões, todas as incisões foram suturadas. As incisões foram agrupadas em três grupos principais como incisões a laser de 1,5, 3 e 5 W. Um quarto grupo é um grupo controle de

pele normal de coelho. Em seguida, os grupos principais foram subdivididos em sete subgrupos dependendo do tempo entre a realização das incisões até o sacrifício dos animais em 0-12 horas, 0-1 dia, 0-3 dias, 0-7 dias, 0-14 dias, 0-21 dias e 0-28 dias, cada subgrupo foi composto por cinco coelhos com um total de 30 incisões.


Cuidados pós-operatórios


Os animais foram colocados em leito limpo e seco até a recuperação. As feridas foram cuidadosamente observadas e desinfetadas diariamente com solução de Betadine e os animais foram verificados quanto a atividades normais como comer e caminhar. Os animais foram também pesados; não foi permitido que o peso corporal caísse mais de 15% do peso original.


RESULTADOS


Este estudo examinou a histologia cronológica da cicatrização de feridas para definir a arquitetura da ferida. O exame histológico mostra os seguintes achados:


As primeiras 12 horas após as incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: os achados histológicos mostram remanescente de tecido e coágulo sanguíneo aderido à superfície epitelial do local da incisão com células inflamatórias dispersas mínimas.


Incisões cirúrgicas com laser diodo 3W: os achados histológicos mostram a presença de coágulo sanguíneo na ponta do local da incisão. Há infiltração moderada de células inflamatórias ao longo da margem. Há uma leve hiperatividade da arquitetura da ferida.



Incisões cirúrgicas com laser de diodo 5 W: os achados histológicos mostram a presença de coágulo sanguíneo com moderada infiltração de células inflamatórias principalmente na base do corte da incisão e hiperatividade da arquitetura da ferida.


Um dia após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: o achado histológico mostra uma forte infiltração de células inflamatórias, principalmente leucócitos do núcleo polimorfo (PMNS) na margem e na base da ferida e penetra no coágulo sanguíneo que preencheu o espaço vazio da incisão.


Incisões cirúrgicas com laser diodo 3 W: o achado histológico mostra intensa infiltração de células inflamatórias na margem e na base da ferida. Pode-se observar o remanescente do coágulo sanguíneo fortemente penetrado por células inflamatórias na base da ferida, espessamento da camada da epiderme e hiperatividade da arquitetura do tecido. O epitélio superficial apresentou leve infiltração de células inflamatórias.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 5 W: o achado histológico mostra uma forte infiltração de células inflamatórias ao longo do lado da incisão, da base até a superfície, e preencheu completamente o coágulo sanguíneo com células inflamatórias, hiperatividade epitelial moderada com espessamento moderado da camada da epiderme (alteração moderada no tecido arquitetura).


Três dias após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: o achado histológico mostra superfície de incisão bem definida com moderada infiltração de células inflamatórias. Há uma leve hiperatividade epitelial com reepitelização na margem da incisão para definir a superfície epitelial.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 3 W: o achado histológico mostra forte infiltração de células inflamatórias com o coágulo sanguíneo totalmente preenchido com células inflamatórias em direção à margem da ferida Hiperatividade tecidual moderada e espessura moderada da camada da epiderme.


Incisões cirúrgicas com laser diodo 5 W: o achado histológico mostra hiperatividade epitelial, espessamento da camada epidérmica com infiltração moderada de células inflamatórias.


Sete dias após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: o lado da incisão mostra a presença de leve reação de hiperplasia do epitélio com presença de melanócitos ativos na camada de células basais, o espaço vazio é completamente preenchido com tecido de granulação com forte infiltração de células inflamatórias.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 3 W: o achado histológico mostra uma fina camada de reepitelização da incisão da ferida e ainda alguma área mostra continuidade do epitélio, a camada derme subjacente de forte infiltração de células inflamatórias está presente da ponta até a base da ferida incisão.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 5 W: o achado histológico mostra hiperatividade da camada epidérmica, perda de continuidade entre os dois lados da ferida e reepitelização das bordas da incisão da base com infiltração de células inflamatórias e tecido de granulação presente.


14 dias após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: o achado histológico mostra espessura total do epitélio da epiderme cobrindo o estroma de tecido conjuntivo fibrovascular altamente celular da derme, sem evidência de apêndice cutâneo (folículos pilosos, glândulas sudoríparas e sebáceas).


Incisões cirúrgicas com laser diodo 3W: o achado histológico mostra semelhança com a arquitetura da ferida das incisões cirúrgicas com laser diodo 1,5 W, mas a diferença está na hiperplasia (mais espessamento no epitélio).


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 5 W: o achado histológico mostra hiperplasia epitelial leve na epiderme, cobrindo o sublinhado de fibras de colágeno frouxamente dispostas, altamente celulares, com numerosos vasos sanguíneos vistos na derme.


21 dias após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W: o achado histológico mostra espessura total da epiderme ao longo da superfície cobrindo a abundância de fibras de colágeno, fibras de colágeno recém-formadas em áreas mais profundas (base da ferida) estroma de tecido conjuntivo fibrovascular está presente, também há alguma pele apêndices.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 3 W: o achado histológico é quase semelhante à arquitetura da ferida das incisões cirúrgicas com laser de diodo de 1,5 W.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 5 W: o achado histológico mostra fina camada de epitélio sem cristas rete cobrindo tecido conjuntivo fibrovascular altamente celular.


28 dias após a preparação das incisões:


Incisões cirúrgicas com laser diodo de 1,5 W: o achado histológico mostra achados semelhantes com incisões após 21 dias de preparação de incisões de 1,5 W e com camadas normais de pele.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo 3 W: o achado histológico mostra achado semelhante com incisões após 21 dias de preparação de incisões de 3 W, tecido cicatricial está presente.


Incisões cirúrgicas com laser de diodo de 5 W: O achado histológico mostra achados semelhantes com incisões após 21 dias de preparação de incisões de 5 W, tecido cicatricial está presente.


DISCUSSÃO


A reação celular inflamatória (infiltração) foi mais proeminente nas incisões com laser de diodo de potência de 3 W e 5 W, da base à ponta do local da ferida, do que nas incisões com laser de diodo de potência de 1,5 W durante o período do processo de cicatrização. Isto corresponde com Taylor e cols. e Vescovi e colaboradores.

As células epiteliais iniciaram a proliferação em todas as feridas após a cirurgia, mas diferem no intervalo de tempo conforme o grupo com diferentes potências de laser onde as células epiteliais proliferaram mais cedo no local das incisões feitas com laser de diodo de potência de 1,5 W do que naquela feita com 3 W e Laser de diodo de potência de 5 W. Este resultado valida com Luomanen e cols. como descobriram que as células epiteliais proliferam mais precocemente ao diminuir a potência do laser utilizada no preparo da incisão).

A produção de colágeno de fibras de colágeno altamente celulares frouxamente dispostas que regeneraram a partir do tecido de granulação preencheu o espaço da incisão da ferida por estroma de tecido conjuntivo (tecido fibrovascular) com localização proeminente de células fibroblásticas fusiformes (as células responsáveis pela produção de colágeno) e numerosas com diferentes o tamanho dos vasos sanguíneos recém-formados foi diferenciado durante o processo de regeneração tecidual. Este processo foi mais rápido em incisões de laser de diodo de potência de 1,5 W em comparação com as incisões de laser de diodo de potência de 3 W e 5 W. Este resultado concorda com Taylor e cols. como constatou que houve defasagem na produção de colágeno com o uso de laser de alta potência).

A regeneração ocorreu mais rapidamente e com menor contração nas incisões com laser diodo de potência de 1,5 W em intervalo de 7 dias após a ferida.

Os melhores resultados de cicatrização microscópica foram observados em todos os subgrupos após 14 dias de intervalo de cicatrização da ferida. Este resultado está de acordo com Luomanen e cols. e Perussi e cols. como foi descoberto que a cicatrização dos tecidos moles foi concluída em todos os locais da ferida com laser após 14 dias).


CONCLUSÃO


A regeneração ocorreu mais rapidamente e com menor contração nas incisões com laser diodo de potência de 1,5 W em intervalo de 7 dias após a ferida. Os melhores resultados de cicatrização microscópica foram observados em todos os subgrupos após 14 dias de intervalo de cicatrização da ferida. Os resultados deste estudo recomendam o uso do laser diodo de 940 nm em cirurgia de tecidos moles como uma ferramenta precisa, considerando os parâmetros do laser adequados para a tarefa de tratamento necessária.


Confira o artigo completo no International Medical Journal Vol. 20, No. 4, pp. 502 - 504 , August 2013

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